十足目虹彩病毒1（Decapod iridescent virus 1，DIV1）属虹彩病毒科（Iridoviridae）十足目虹彩病毒属（Decapodiridovirus），是危害虾类养殖产业的重要病毒性病原[1]。该病毒传播速率快、宿主范围广，主要暴发于浙江、广东和江苏等沿海对虾养殖地区，患病对虾的病毒检出率、死亡率均较高[2-3]。刘敏等[4]分析指出，罗氏沼虾感染DIV1后，初期靠塘边缓慢游动，一周内额剑基部甲壳内部会出现白色斑点，后期出现虾壳、肝胰腺、鳃部发红，空肠空胃等症状，并出现大量死亡现象。Qiu等[5]采集并分析了某养殖场患有白头白嘴病的罗氏沼虾、克氏原螯虾、南美白对虾样本，病原学检测显示，所有样本均为DIV1阳性。王文雁等[6]研究发现，患白头白嘴病的罗氏沼虾造血细胞的细胞质被大量DIV1颗粒侵染。以上结果说明DIV1是引起罗氏沼虾“白头”的病原体。
罗氏沼虾是广东省肇庆市主要水产养殖品种，养殖面积超0.86万hm2，其产量和效益较为突出。罗氏沼虾养殖产业发展迅猛，然而病害问题也愈发严重，尤其是DIV1。目前对DIV1的研究主要集中在病原分离、分子检测、组织病理等方面，流行病学调查资料以及有效的防控手段有待进一步完善。本研究采用环介导等温扩增技术（LAMP），调查分析了2023—2024年该地区罗氏沼虾DIV1的流行情况，为该病毒的防控提供参考。
1 调查内容
1.1 调查方法
调查时间为2023年1月至2024年12月，分4个季度[第一季度（1—3月）、第二季度（4—6月）、第三季度（7—9月）和第四季度（10—12月）]，共采集320份罗氏沼虾样品。定点监测：水生动物疫病的监测点设于研究区罗氏沼虾主养区，选择若干个大、中、小养殖场及苗种场进行定点、定时监测采样，曾发生过暴发性死虾或曾出现阳性检测结果的养殖场或苗种场及其周边地区列为重点监测点。流动监测：对研究区水产养殖区域发病的养殖场或苗种场及其周边地区进行流动监测采样。
1.2 样品采集
对于体长≤3 cm的虾苗，取整尾虾，每100尾虾可合并为1份样；3 cm<体长<6 cm的虾，取头胸甲，每20尾虾合并为1份样；体长≥6 cm的虾，取造血器官、肝、脾和肾，每10尾虾合并为1份样。按照世界动物卫生组织发布的《水生动物疾病诊断手册（2006）》的规定，监测采样时应优先采集濒临死亡或有临床症状的活虾。样品用95%乙醇保存，运回实验室用于后续检测。
1.3 基因组总DNA的提取
将保存于95%乙醇溶液中的罗氏沼虾组织取出，先用无酶水（上海生物工程有限公司）清洗1次，吸水纸吸去多余水分；随后采用水生动物组织基因组DNA/RNA提取试剂盒（FAST）（071131M，广州双螺旋基因技术有限公司）进行DNA提取，保存于-20 ℃冰箱，备用。
1.4 病原检测
采用LAMP进行病原检测。参考十足目虹彩病毒1（DIV1）核酸检测试剂盒（恒温荧光法）（032221MⅢ，广州双螺旋基因技术有限公司）说明书，取出所需测试数的已含有反应液A-DIV1-I的PCR管，离心30 s，将试剂完全解冻；在管盖上标记管名（阴性对照管NG、样品XX、阳性对照管PG）。各PCR管管底分别加入1 μL B-I，其中阴性对照管加入B-I试剂后立即盖紧管盖，其他各管分别沿管壁缓慢加入2 μL模板，顺序为待测样品模板、PG-DIV1-I，盖好管盖，离心30 s，将离心后的PCR反应管放入环介导等温扩增仪Dhelix 1610（广州双螺旋基因技术有限公司），启动扩增反应，恒温63 ℃，扩增45 min。仪器自动判定结果，若显示“阳性”则样品中含有DIV1；若显示“阴性”且没有出现“S”型扩增曲线，则样品中不含DIV1或含量低于检测限。
2 调查结果
由图1可知，2023年度共采集样品176份，第一季度、第二季度、第三季度和第四季度样品的DIV1阳性检测率为0（0/32）、22.86%（16/70）、5.88%（2/34）和25.00%（10/40）；2024年度共采集样品144份，第一季度、第二季度、第三季度和第四季度样品的DIV1阳性检测率分别为6.67%（2/30）、3.70%（1/27）、5.26%（2/38）和24.49%（12/49）。总体来看，2023年和2024年罗氏沼虾DIV1的阳性检出率分别为15.91%（28/176）和11.81%（17/144）。
3 结论与讨论
3.1 流行病学特征
本研究采用LAMP对320份罗氏沼虾样品进行DIV1检测，结果显示，2023年和2024年其DIV1的阳性检出率分别为15.91%和11.81%，表明该地区的罗氏沼虾存在一定的DIV1感染风险。在采样过程中发现，患病个体大多表现为活动力明显下降，反应缓慢，摄食量减少甚至停止；虾壳变薄、软化，附肢发红，头胸甲下可见白色三角区（常被称作“白头”或“白点”）。陈形[7]研究发现，感染DIV1虾的肝胰腺血窦、造血组织和甲壳下上皮存在嗜酸性包涵体和核固缩现象，并且部分嗜酸性包涵体里面或周围有微小的嗜碱性染色。因此，“白头”可作为DIV1感染的典型临床指征，为现场快速筛查提供重要依据，但确诊需要通过LAMP等分子手段进行病原学验证。
3.2 发病原因分析
本研究发现，2023年第二季度罗氏沼虾阳性检出率较高，虾苗也有检出。此调查结果与Qiu等[8]研究结果一致，DIV1主要流行于5—6月，可感染所有规格的虾，体长4～7 cm的幼虾病毒检出率较高。张颖杰等[9]研究表明，水温28～32 ℃时易暴发虹彩病毒。第二季度研究区罗氏沼虾进入养殖旺季，投喂量较大，残饵腐败加速水质恶化，加之水温较高，因此DIV1检出率较高。此外，本研究发现，研究区第四季度罗氏沼虾阳性检出率在两年中均较高。通过实际走访和调查发现，该地区罗氏沼虾在11月前进入冬棚养殖阶段，为保持水温，养殖户较少进行通风，虾塘的溶解氧较低，水质较差。因此，做好养殖过程中的水质管理对于防控DIV1尤为重要。
2023年罗氏沼虾DIV1阳性检出率高于2024年。通过年气象数据分析和养殖场实地调研发现，2024年呈现以下疫病防控有利因素：一是极端天气事件（持续性降水、强对流暴雨及低温寒潮）发生频率较低；二是饲料质量较好。由此可见，环境和水生动物的营养状态与疫病的发生息息相关。
3.3 防控对策
开展罗氏沼虾DIV1的流行病学调查，对罗氏沼虾DIV1的防控具有重要的现实意义。养殖过程中，应选择抗病力强且不带DIV1的种苗；“白头”作为一个重要的临床判断指标，一旦出现该特征，及时阻断病原的传播与扩散，做到早发现、早处理；选择合适的养殖密度，通过适当增加增氧设备、水底种植茜草等植物等措施，优化养殖环境管理；科学投喂优质饲料，维持良好的营养状态。通过以上措施强化宿主营养与健康管理，可降低DIV1暴发风险。
综上，本研究利用LAMP对研究区2023年和2024年的320份罗氏沼虾样品进行了DIV1检测，结果显示，2023年第一季度、第二季度、第三季度和第四季度样品的DIV1阳性检测率分别为0、22.86%、5.88%和25.00%；2024年分别为6.67%、3.70%、5.26%和24.49%，表明该地区罗氏沼虾存在一定的DIV1感染。其中，不同季度与年份的检出率有所不同，主要与温度、水质等养殖环境和水生动物的营养状态有关。养殖中，需统筹调控病原体、水生动物与水环境的相互作用，维持三者稳态平衡，构建健康绿色养殖体系，以有效防控DIV1的发生。