阿维菌素（Avermectin，AVM）作为一种广泛推广使用的高效抗寄生虫药物，对大多数寄生虫具有触杀和胃毒作用，可有效治疗家畜、家禽等的皮内、外寄生虫病。随着AVM类药物在农业及畜牧业中的广泛应用，其毒性作用受到人们广泛关注。陈立杰[1]研究表明，AVM染毒后王鸽大脑、小脑、视叶组织均受到损伤。刘慈[2]研究表明，AVM暴露可使鸽脾脏组织发生氧化应激，导致组织形态结构改变。
黄芪为豆科黄芪属植物，常作为补气中药，具有健脾补中、益卫固表、利尿和托毒生肌等功效[3]。其主要化学成分包括黄芪多糖（Astragalus polysaccharides，APS）、皂苷类、生物碱、黄酮类以及多种矿质元素。APS作为黄芪的主要活性成分，能增加正常小鼠和免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞数量，增强巨噬细胞吞噬功能；能使小鼠脾脏增大，脾内浆细胞增生，促进抗体的合成，增强体液免疫功能[4]。此外，APS还可促进小鼠网状内皮系统的吞噬功能，提高经红细胞免疫的小鼠血清中溶血素的浓度，并诱导多种白细胞介素的产生[5]。
鸽子对环境中的化学物质变化较为敏感，是用于监测生态环境变化的首选生物之一。本研究以王鸽作为研究对象，探究APS对AVM导致免疫能力下降鸽子的免疫调节作用，为绿色兽药研发提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验动物
选取3月龄的白羽王鸽，购自黑龙江大庆市林甸县庆缘动物养殖场，体重在650～660 g。正常隔离喂养3 d，淘汰病鸽、弱鸽，第4天选择40只精神状态良好，羽毛光滑，饮食正常，体重相近的健康鸽子。
1.2 药液配制
在黑暗条件下，将60 mg AVM溶于10 mL丙酮溶液中，配成染毒母液；然后，将其喷洒至1 kg的鸽子日粮上，待丙酮完全挥发，得到染毒鸽粮。
1.3 试验设计
将40只健康鸽子随机分为4组，每组10只。空白对照组：鸽子正常生长，不进行任何染毒及给药处理。模型组：鸽子持续30 d喂食含AVM的染毒鸽粮（60 mg/kg），建立AVM致免疫损伤模型。APS低剂量组：造模结束后，将饮水更换为低剂量APS溶液（5 mg/d），持续给药15 d。APS高剂量组：造模结束后，将饮水更换为高剂量APS溶液（10 mg/d），持续给药15 d。
1.4 试验方法
1.4.1 鸽子状态观察
试验结束后，对比造模前后，以及给药前后鸽子的饮食状态、体毛特征、行为表现等。
1.4.2 体重及脾脏指数测定
采用颈部放血法，模型组和空白对照组鸽子在染毒30 d后立即剖杀，药剂组鸽子在试验45 d后立即剖杀。剖杀前，称取每只鸽子重量并做好记录。每只鸽子剖杀后迅速取出脾脏称重，计算脾脏指数，计算如式（1） 。
脾脏指数（g/kg）=脾脏重量（g）÷体重（kg）
1.4.3 血清指标检测
每组鸽子收集8~10 mL/只的血液并做好标记。收集后，加入EDTA（乙二胺四乙酸）作为抗凝剂，在1 500 r/min、4 ℃条件下，离心20 min获得血清。检测血清中免疫球蛋白A（IgA）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）的含量。取50 μL血清加入样本孔，标准孔则加入等量标准品。随后按照试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明书操作步骤进行，在15 min内，使用紫外分光光度计在450 nm波长处测定各孔的吸光值。将标准品的吸光值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，算出回归线方程，将样品的吸光值代入方程，计算样品的浓度。
1.5 数据处理
利用SPSS 17.0软件进行数据分析，组间数据差异性通过T检验分析。
2 结果与分析
2.1 鸽子状态观察分析
空白对照组鸽子精神状况良好，饮食、饮水正常，毛色正常。模型组鸽子整体疲乏懒惰，少食少饮，毛色黯淡，羽毛凌乱；有时极度狂躁，部分个体具有攻击同类的倾向。APS高剂量组相比于模型组整体状况有所改善，APS低剂量组较模型组变化不大。
2.2 鸽子体重及脾脏指数
由表1可知，与空白对照组相比，模型组鸽子的体重和脾脏指数明显下降（P<0.05），表明造模成功。与模型组相比，APS高剂量组鸽子的体重和脾脏指数明显增加（P<0.05）；APS低剂量组鸽子的体重和脾脏指数无明显变化。说明高剂量的APS可缓解由AVM所致的鸽子体重下降及脾脏指数降低，对AVM诱导的鸽子免疫损伤具有一定的改善作用。
表1 鸽子体重以及脾脏指数 |
| 分组 | 体重/ kg | 脾脏指数/（g/kg） |
|---|---|---|
| 空白对照组 | 0.657±0.015 | 1.493±0.091 |
| 模型组 | 0.645±0.007* | 1.399±0.076* |
| APS低剂量组 | 0.645±0.007 | 1.403±0.007 |
| APS高剂量组 | 0.654±0.008# | 1.481±0.044# |
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2.3 鸽子血清指标
由表2可知，与空白对照组相比，模型组鸽子血清中IgA、IFN-γ含量明显下降，TNF-α、IL-4的含量明显升高，差异均具有统计学意义（P<0.05，<0.01），表明造模成功。与模型组相比，APS高剂量组鸽子血清中IgA含量明显提高（P<0.05）；APS低剂量组鸽子血清中IgA含量有略微提高，但差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组相比，APS高剂量组和低剂量组鸽子血清中TNF-α水平明显下降（P<0.01，<0.05）。与模型组相比，APS高剂量组血清中IFN-γ含量明显上升（P<0.05）；APS低剂量组血清中IFN-γ含量有所上升，但差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组相比，APS高剂量组鸽子血清中IL-4含量明显下降（P<0.05），APS低剂量组鸽子血清中IL-4含量有所下降，但差异无统计学意义（P>0.05）。
表2 鸽子血清中各指标水平 |
| 分组 | IgA /（g/L） | TNF-α/（pg/mL） | IFN-γ/（pg/mL） | IL-4/（pg/mL） |
|---|---|---|---|---|
| 空白对照组 | 1.253±0.049 | 47.065±3.127 | 55.387±3.384 | 26.443±2.067 |
| 模型组 | 1.199±0.045* | 56.724±2.467** | 50.630±2.884** | 30.13±3.005** |
| APS低剂量组 | 1.206±0.041 | 53.909±2.560# | 51.242±3.030 | 29.076±3.401 |
| APS高剂量组 | 1.239±0.033# | 49.474±1.590## | 55.416±2.901# | 27.500±1.893# |
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综合表明，APS可以调节AVM中毒鸽的免疫功能，主要表现在增强免疫力，消炎消肿等方面，其中高剂量组的作用效果较佳。
3 结论与讨论
免疫器官的正常发育对维持机体免疫功能至关重要。本研究通过测定脾脏指数发现，APS可有效缓解鸽AVM中毒引发的脾脏损伤，使鸽脾脏炎症减少。高剂量的APS作用效果较佳。
刘慈[2]研究发现，AVM中毒鸽的脾脏中IFN-γ的分泌能够被辅助性T细胞分泌的IL-4所抑制，在AVM暴露下脾脏组织IL-4的表达水平提高。这与本研究中的模型组IL-4含量相较于空白对照组有所上升的结果相符。在给药之后，APS高剂量组鸽子血清的IL-4含量低于模型组（P<0.05）。
综上，APS对AVM中毒鸽子具有一定的免疫调节作用，对脾脏损伤有一定的保护作用，其机制可能通过调节炎性介质释放、影响免疫球蛋白水平以及增强机体整体免疫力等途径实现。该试验为开发APS作为新型兽药提供参考，同时也为其他多糖类药物作为动物保健品提供新的思路。